Funcións fisiolóxicas das canles de cloruro familiar CLC | Medicina / Ciencias

med Sci (París) 2002; 18: 595-604

Funcións fisiolóxicas das canles de cloruro familiar CLC

Funcións fisiolóxicas das canles de cloruro de CLC

Jacques Teulon * e Alain Vandewalle

Inserm U.426 e U.478, IFR 02, Facultade de Medicina Xavier Bichat, 75780 Paris CEDEX 18, Francia

* [email protected]

Resumo

A clonación dunha canle de cloruro no órgano eléctrico do torpedo en 1990 permitiu a identificación dunha gran familia de canles de cloruro cuxos representantes tamén se expresan en bacterias e plantas ou mamíferos. Estas canles, chamadas CLCS ou dependentes da tensión, teñen unha distribución moi variada e soliar e poden expresarse na membrana plasmática como nas membranas dos organismos intracelulares. O seu descubrimento recente significa que moitos aspectos da organización, as propiedades electrofisiolóxicas e as funcións destas canles permanecen indeterminadas. Tomamos o stock deste artigo sobre datos actuais, destacando tres funcións fisiolóxicas principais: o control da excitabilidade muscular, a participación na absorción de cloruro no tubo renal e na implicación en fenómenos de endocitosis.

Resumo

A clonación dunha canle de cloruro do órgano eléctrico do peixe torpedo en 1990 permitiu ao descubrimento dunha gran familia molecular de canles de cloruro cunha expresión xeneralizada en organices como bacterias, plantas e mamíferos. Estas canles, chamadas canles de cloruro dependente de Voltage de Voltaxe de CLC, están localizados tanto na membrana plasmática como nas membranas de varios orgánicos intracelulares. Debido ao seu descubrimento recente, a súa organización estrutural, propiedades electrofisiolóxicas e funcións non son totalmente destacadas. Este artigo revisa o que está a piques de coñecer a Familia da Canle do Cloride CLC e pon en énfase en tres funcións de man: Control de excitabilidade muscular, absorción de cloruro no túbulo renal e implicación na endocitosis.

© 2002 Medicina / Ciencias – Inserm / SRMS

En comparación con outras canles de ións, os canles CL durante moito tempo xogaron o papel de estranxeiro interesante pero marginal. Isto é en parte debido a que as conducturas son máis difíciles de detectar que outras, pero tamén, máis fundamentalmente, ás funcións das canles da canle da membrana plasmática son discretas na maioría dos tecidos. Fóra do campo do sistema nervioso e os seus receptores de tipo GABAA e glicina, dúas variedades de tecidos son a excepción: o músculo esquelético, o tecido no que se mostrou en 1960 que a conductancia CL representa aproximadamente o 80% da condutividade da membrana total e epitelios. O papel fundamental das canles CL nas estruturas epiteliales que absorben ou segregan os cl-iones xurdiron só máis tarde nos anos 1970-1980. Atópase ao final deste período que o illamento do xene cuxas mutacións son responsables do regulador de condutividade do transMembrane de Fibrose Cistic (CFTR) revolucionou o dominio das canles CL e deulle a magnitude que coñecemos hoxe.

A familia de canles CLC (Chloride Channel) foi fundada ao mesmo tempo seguindo a clonación da canle CL desde a liña torpedo (CLC-0) por Thomas J. Jentped et al. (→). Os canles de CLC están expresados en organismos tan variados como lévedos, arqueobacterias, bacterias, plantas e animais (figura 1a). Por exemplo, hai 6 canles de CLC no Caenorhabditis Elegans Nematode Ver, e 9 canles de CLC diferentes foron identificados en mamíferos. Reagrupan en tres subfamilias principais (Figura 1A). A súa estrutura secundaria aínda non está completamente esclarecida (Figura 1 (b): o modelo inicial, que incluíu 13 segmentos hidrofóbicos transmembrana, foi modificado porque os segmentos S9-S12 constitúen rexións hidrofóbicas masivas cuxa organización é difícil de desvelar. Existen dificultades análogas para o dominio S4 que, segundo os autores, é extracelular ou transmembrana. En total, os CLC terían 10 a 12 segmentos trans-membrana e un único sitio de glicosilación común (Figura 1B). Hai un consenso para admitir que a estrutura cuaternaria é polo menos dimérico.

(→) m / s 1999, n ° 8-9, p. 1003

Thumbnail Figura 1.

A familia molecular de canles de cloruro CLC. A.

Canles CLC de eixo filogenético. Identificáronse tres subfamilias.Están representados os CLCS descritos en humanos (en vermello) máis os de varios organismos: o gusano Caenorhabditis elegans (CE), a planta Arabidopsis tha-liana (AT), a levadura Saccharomyces cerevisiae (SC) ea bacteria Escherichia Coli ( Ec). CLC-0 é a canle de órganos eléctricos do Torpedo Ray. Os números designan as tres subfamilias de canles CLC. Caenorhabditis Eleganistas ten 6 canles CLC: Catro pertencen á subfamilia 1 mentres que os dous últimos, que non se mostran no diagrama, pertencen ás subfamilias 2 e 3. B. Topoloxía da membrana. A análise hidropática identificou inicialmente 13 dominios de hélice α pero o segmento 13 é realmente intracelular. A localización do segmento 4 é controvertida. Os patróns chamados CBS, inicialmente identificados en cistationine-b sintase, non teñen ningunha función clara. Unha mutación nestas áreas está á orixe dun enderezo defectuoso da proteína CLC de léveda (GEF1) pero non ten ningún efecto noutros CLCS. A canle que conecta S8 a S9 é un sitio de glicosilación para todas as canles de CLC. C. Vista ampliada dos segmentos 2-5 Como é postulado por Christoph Fahlke e Alfred George. Teña en conta a localización da rama transmisa do S4 (non identificada como aquí). Cada letra representa un aminoácido (dependendo do código habitual). Calquera substitución de aminoácidos nos puntos identificados en azul ou branco causa un cambio na selectividade aniónica. En azul claro están representados aminoácidos cuxa mutación aumenta a permeabilidade do sodio. A mutación de falsa dirección que reemplaza unha glicina cun ácido glu-mole na posición 230 é unha causa de miotonía conxénita, probablemente debido ao aumento da permeabilidade do sodio resultante.

Os CLCS teñen unha distribución de tecidos, celulares e subceles moi diversos (Táboa 1). Isto suxire variadas funcións fisiolóxicas pero, polo momento, adoitan ser especulativas. O obxectivo deste artigo é avaliar en xeral o lugar de DES CLC na “Fisioloxía” das canles CL confiando nas tres funcións que, en mamíferos, están identificados de forma segura: estabilización do potencial de membrana no músculo esquelético (CLC-1) ), a absorción de cloruro no túbulo renal (CLC-K2 ou CLC-KB) e fluxos de protóns acompañantes en varias estruturas (CLC-5). A descrición de certas propiedades características das canles de CLC, porén, parecía necesaria, non só porque sería estraño falar de canles iónicos sen referirse á vez ou outra á electrofisioloxía, senón tamén porque estas propiedades axudan. Axuda a comprender a certa trazos fisiopatolóxicos.

Táboa I.

Características xerais das canles de cloruro de CLC de mamíferos. A distribución do tecido dada non é exhaustiva e pode variar dunha especie a outra. As mutacións CLC-7 están á orixe de dúas formas de osteopérios humanas: unha forma autosómica recesiva e unha forma autosómica dominante (albers-schönberg tipo II enfermidade). A dexeneración de retina non ten a mesma orixe en todos os modelos de rato con discapacidade: no caso da invalidación do xene de codificación do CLC-2, é unha dexeneración da capa exterior pigmentada; No caso de CLC-3, unha dexeneración da neuro-retina e, no caso de CLC-7, dunha compresión do nervio óptico que pode ir acompañado dunha consecución da retina.

Canles iónicos con propiedades orixinais

As propiedades electrofisiolóxicas das canles CLC son coñecidas principalmente grazas aos estudos de CLC-0, CLC-1 e CLC-2, os datos sobre Os outros CLC son limitados, contraditorios ou ausentes.

Unha propiedade fundamental das canles iónicas é a súa selectividade, é dicir, a capacidade de perder só certos ións e excluír a outros. En xeral, as canles aniónicas (incluídos os CLC) exclúen as cacións, pero mal discriminan con diferentes anións, a proporción de permeabilidade entre o ión máis imprimente eo ión menos impregnante raramente superan os 10. Bicarbonato é excepcional cunha permeabilidade 50 veces máis reducida que a de CL- no caso de CLC-1. O estudo electrofisiolóxico das canles CLC-1 CLC-1 mostrou que unha área do segmento S4 é responsable da baixa permeabilidade aos cationes (Figura 1C). En certos puntos, a substitución dun aminoácido único aumenta a permeabilidade do sodio dun factor 6. Este descubrimento é importante para a comprensión dos mecanismos da selectividade aniónica.

canles de CLC teñen a particularidade de ter dous Poros de condución por canle.É estudando a canle CL do membro eléctrico (CLC-0) da liña de torpedo, purificada e reconstituída en bicapa lipídica artificial, que Chris Miller ten, o primeiro, observou que os nichos actuais producidos por unha única canle oscilada entre Un nivel pechado e dous niveis abertos, un dobre dobre (figura 2a). A partir deste resultado sorprendente: unha soa canle debe producir só ranuras actuais dunha única amplitude – deduce que cada canle CLC-0 tiña que ter dous poros distintos e independentes, chamados proto-poros.

Cristalográfica CLC Canles de bacterias confirmaron, máis resultados directos e electrofisiolóxicos. Esta estrutura de canle de poro dobre é orixinal xa que, en xeral, todas as subunidades dunha canle iónica contribúen á formación dun único poro de condución.

A canle CLC-0, tantos canles de ións, activa rapidamente baixo a Efecto da despolarización (é dicir, cando o potencial se fai menos negativo) (Figura 2C). Non obstante, a sensibilidade de tensión non resulta da presenza dun sensor de tensión integrado na proteína, como é o caso dos cationatos dependentes da tensión. A apertura de cada prototro da canle é, de feito, controlada polo propio CL, que se une a dous sitios de unión situados dentro do mesmo interior do poro de condución. O apego do anión no sitio máis profundo está influenciado pola diferenza de potencial transmembrana, e é este mecanismo que confire sobre o proto-poro a súa sensibilidade á tensión. A diminución da concentración de clin-extracelulares, o que fai que sexa máis difícil conectar o clip ata os sitios de unión, ten o efecto de mover a curva de activación a potenciais máis positivos (Figura 2C). Os CLC-0S teñen un mecanismo dependente de segunda voltaxe que, a diferenza do primeiro, controla simultaneamente a actividade dos dous proto-poros: é unha inactivación inducida por despolarizacións a longo prazo (> 20 segundos) e levantado pola hiperpolarización (Figura 2b). Esta inactivación maniféstase por longas interrupcións da actividade (figura 2a, denotada I).

Miniatura Figura 2.

Propiedades electrofisiolóxicas do CLC. A. Gravación de acordo co tempo das correntes producidas por unha única canle CL do órgano eléctrico do torpedo, reconstituída nunha bicapa lipídica artificial. A ordenada exprésase en picoamperes. A apertura dun só poro proto produce un nicho de corrente (observado m para o medio) cuxa amplitude dobra cando os dous proto-poros están abertos ao mesmo tempo (observado u por riba). D (abaixo): pechado; I: Inactivado (gravación reproducida). B. Vista esquemática do funcionamento da canle CLC-0 (despois). A canle está formada por dous protagones que constitúen unha soa canle. Cada proto-poros está pechado por unha barreira independente (en negro) que simboliza un cambio de conformación; A fixación de CL- (pellets amarelos) en sitios situados dentro do proto-poros facilitar a apertura deste último. O apego do anión é favorecido pola despolarización da membrana. Outra barreira (laranxa) controla simultaneamente os dous proto-poros. As letras baixo cada diagrama refírense á inscrición que se mostra en parte A. I: A barreira común está pechada. A canle non conduce, que as barreiras dos proto-poros están abertos ou non. M: A barreira común está aberta. A canle pode pasar anións. No exemplo ilustrado, só unha das dúas barreiras usadas polos proto-poros está aberta. U: A barreira común está aberta, así como os dous proto-poros. A intensidade da corrente é dobre do que se observa en M. D: a barreira común está aberta, pero os dous proto-poros están pechados. Non hai pases correntes. C. Influencia dos iones extracelulares sobre a probabilidade de abrir do proto-poro. A probabilidade de apertura dos aumentos de proto-poros coa despolarización segundo o mecanismo explicado na figura 2a. A diminución do CL-move a curva de activación a potenciais máis positivos. (Adaptado de).

Se todas as canles de CLC dependen da tensión, o significado desta dependencia E a súa intensidade é variable dunha canle a outra. Unha hipótese permite representar esta diversidade: considera que todos os CLCS potencialmente teñen os dous mecanismos (activación / inactivación) demostrado para CLC-0 pero que os seus respectivos pesos varían dunha canle a outra. Nunha activación extrema e rápida por despolarización domina: este é o caso de CLC-1 (ver a continuación). No outro extremo, o levantamento da inactivación por hiperpolarización domina: este é o caso de CLC-2 que está activado con potenciais moi negativos.

Control da excitabilidade muscular por CLC-1 Channel

As mutacións da codificación do xene A canle de cloruro CLC-1 son responsables do home de miotonía conxénita (ou enfermidade de Thomsen), que é Unha enfermidade autosómica dunha prevalencia dominante e moi rara e miotonia xeneralizada, máis frecuente e recesiva. Estas enfermidades, que pertencen á clase de miotonías non distróficas, maniféstanse por unha prolongada rixidez muscular que se produce como resultado dun movemento voluntario. As manifestacións están agravadas por descanso e melloraron gradualmente o exercicio. Este fenómeno débese a que os trens de potenciais de acción continúan sendo producidos despois do cesamento do esforzo e atrasar a relaxación muscular. Curiosamente, hai unha liña de cabras estadounidenses que sofre dunha miotonía similar dun personaxe dominante. Shirley Bryant et al. demostraron que: (1) a conduta CL de fibra muscular foi moi reducida en cabras miootónicas; E iso (2) a inhibición farmacolóxica da conductancia cortou un fenotipo miootónico en cabras normais. Isto indicou que o miotonio probablemente resultou dunha diminución da condutancia muscular esquelética, unha hipótese confirmada ao mesmo tempo nas biopsias do paciente. O mesmo grupo mostrou aínda máis que unha estimulación eléctrica da intensidade adecuada produce un potencial de acción única nunha fibra muscular normal de cabra mentres induce unha serie de potenciais de acción en cabra myotónica (figura 3a).

Thumbnail Figura 3.

A canle CLC-1 e MyOTONY. A. Rexistros de potenciais de acción e potencial electrotônico inducido por estimulación eléctrica sobre fibras musculares intercostales de cabra. A intensidade da estimulación eléctrica aplicada á fibra muscular aparece baixo cada rexistro e exprésase en nanoamperes (reproducido, co permiso de J Physiol). A: Control de fibra, só se observa un potencial de acción; B: A fibra dun animal miootónico, varios potenciais de acción provocan a estimulación que ten tres veces menos intensidade; C: Fibra de testemuña, obsérvase un tren potencial de acción nas fibras de control cando o cloruro extracelular é substituído por un anión incondicional (as canles de cloruro xa non poden realizar a súa función). Esta situación reproduce a resposta observada en cabras myotónicas. B. Representación esquemática da canle CLC-1 e unha serie de mutacións equivocadas en pacientes con miotonía. A primeira letra denota o código do aminoácido salvaxe, o número, a posición e a segunda letra a substitución observada. Estas mutacións, con excepción de G230 (Figura 1C), move a curva de activación a tensións máis positivas. A mutación que se mostra no vermello invierte a sensibilidade á tensión da canle mostrando un fenómeno dominante de activación por hiperpolarización.

Como explicar esta influencia de canles CL en potenciais de acción? Na fibra muscular esquelética, a condutividade representa preto do 80% da constancia da membrana total en repouso e amortiza as variacións do potencial de membrana, controlando así a excitabilidade da fibra e combatendo o efecto despolarizador da acumulación de potasio. En túbulos t, acumulación que ocorre durante a emoción. Este efecto estabilizador desaparece cando o CL-diminúe. Unha corrente de estimulación inferior é entón suficiente para desencadear potenciais de acción. Pódese notar que un papel similar na estabilización do potencial transmembrana é interpretado pola canle CLC-0 no membro eléctrico do torpedo.

Trinta Patóxenos CLC-1 foron descritos no home (Figura 3B). Esta canle ten unha actividade (probabilidade de apertura) que aumenta coa despolarización segundo un perfil cualitativamente similar ao que se mostra para o PROTO-PROTO-PORO CLC-0 (Figura 2C). No caso da forma dominante de Myotonia, a consecuencia da mutación é, a maioría das veces, un desprazamento da curva da probabilidade de abrir a potenciais máis positivos; Isto ten o efecto de diminuír considerablemente o valor da conductancia Cl- ao potencial de descanso (máis do 50%). Unha mutación particular ten efectos moi diferentes porque induce, ademais dunha diminución da condutividade CL (que non se debe a unha alteración da dependencia de tensión), un aumento acentuado da permeabilidade do sodio (Figura 1C e Figura 3B).Unha maior entrada de sodio na fibra muscular non estimulada é probablemente suficiente para causar series de potenciais de acción miootónica.

a canle CLC-KB: participación na absorción renal de cloruro

Outra función das canles CL- é o transporte transpitelial de CL-. Este proceso ten un papel fisiolóxico crucial no ril desde que a ultrafiltración do plasma sanguíneo polos glomeruli dos nefrones ofrece a todos os túbulos de riles un líquido (uns 180 litros por día), rica en NACL, que debe ser reabsorbida no seu case todo. Esta operación lévase a cabo segundo as modalidades variables ao longo do túbulo renal. No túbulo proximal, o transporte da luz do túbulo ao interstium é esencialmente desfile celular. Doutra banda, este transporte é trans-celular e implica a presenza de canles CL- nas porcións máis distas, unha gran rama inferior do mango de Henle e Tube ignorado distal (Figura 4A). En principio, o mecanismo de transporte baséase na existencia dun transporte acoplado de CL-na membrana apical e a combinación dunha bomba NA +, K + -Apase e CL-condutores na membrana basolateral (Figura 4, BC). Patch-Ramp (→) Estudos destacaron dúas CL-na parte cortical da parte inferior da rama cara arriba (Figura 4 (D) e un terceiro na súa parte medular. Doutra banda, non sabemos nada sobre as canles de Túbulos CL-DU BYPSSD DISTAL.

(→) M / S 1987, N ° 9, p. 538 e 1997, n º 10, p. 1157

Thumbnail Figura 4.

Absorción transcelular de cloruro no túbulo renal. A. Diagrama de dous nefrones do ril (adaptado, co permiso de AM J Physiol eo autor). A superficie da renda está a pé, a papilla a continuación. TCD: tubo evidente distal; Bola: porción ancha da rama ascendente do mango de Henle; Bolsa: gran parte da rama ascendente do mango de Henle. En negro, o tubo proximal. B. Diagrama do transporte de NACL no balón. A luz do túbulo, que contén a orina en formación, é á esquerda do debuxo, a intérica á dereita. Están representados: un co-transporte Na + -K + -2cl-, inhibido por furosemida, na + bomba, K + -Apase, condutores K + e unha condución de clin-bollative. O esquema simplifícase para facilitar a comprensión. Esquema de transporte de C. NACL no TCD. Un co-transporte Na + -cl-, inhibido por Thiazides, está presente na membrana apical. D. Patch-Appamp Gravación de “Channel individual” da actividade de dúas canles CL- na membrana de ralas basoladas do balón. Estas canles difieren da súa condutividade elemental: 9 picosiemens nun só caso, 40 picosiemens no outro caso. Un dos problemas actuais é establecer a correspondencia entre as tres canles endóxenas e as canles clonadas.

Os estudos de xenética revelaron que algúns pacientes con Síndrome de Barter usaban mutacións do xene CLC-KB, unha canle CLC, particularmente situado na membrana basolateral da gran rama acendente. De Henle e do túbulo distal. A síndrome de trueque (→) é unha tubulopatía renal para a transmisión autosómica recesiva, de gravidade variable, afectando ás capacidades de transporte de Henle Handle e diminuíndo a potencia da concentración urinaria.

(→) M / S 1996, n. ° 10, p. 1168

Ademais dunha excreción inadecuada de NACL (é dicir, unha fuga de sodio renal), esta síndrome caracterízase por alcalose metabólica, unha hipocalemia de orixe renal e un hiperaldosteronismo secundario con presión normal arterial. Estes trazos son a consecuencia dunha maior carga de NACL no Nefro distal. Unha imaxe clínica menos severa, a síndrome de Gitelman (→) está relacionada cun túbulo distal por borrar. As mutacións inactivadoras de CLC-KB, aínda que ocasionalmente responsables da forma máis grave (síndrome de intercambio antenatal), adoitan estar asociadas a un trueque “clásico” ou mesmo nun fenotipo mixto de Bartter-Gitelman, ambos menos graves. En particular, non hai táboa de nefrocalcinosis e hipercalciana, marca específica de síndrome de trueque (e un ataque á rama ascendente do mango de Henle), non é constante. Polo tanto, é natural pensar que a heteroxeneidade clínica provén do que a expresión de CLC-KB cobre estes dous segmentos tubulares, a menor gravidade que pode ser debido á presenza de varios sistemas de transporte para o Cliente.

(→) m / s1996, n ° 4, p. 541

Os datos actuais enteiros refírense á canle CLC-KB (CLC-K2 no rato) como principal responsable do transporte de cl-nestes segmentos renales. Dúas preguntas permanecen sen resposta.Os primeiros problemas a identidade molecular, non resolvidos ata agora, canles de clin-endóxenos que se caracterizaron por parches (figura 4D). O segundo colócase pola existencia inquietante dunha canle CLC-KA (CLC-K1 no rato) ten un 90% de analoxía con CLC-KB e situado nas mesmas zonas do riñón. Esta canle está involucrada en ningunha enfermidade humana. Os ratones cuxo xene CLC-K1 invalidou a un nefrogénico inipídico de diabetes que sería debido a unha permeabilidade intelixente da porción de Hail da rama ascendente do mango de Henle (Figura 4a).

CLC-5 canle : Participación en endocitosis renal das microproteínas

Se o papel fisiolóxico das canles CLC-1 e CLC-K está ligado á súa localización na membrana celular, o estudo dunha enfermidade renal, enfermidade de dentes (→), revelou a importancia funcional das canles de CLC que se atopan nas membranas intracelulares. A enfermidade dos dentes reúne varias entidades da nefrolítica hereditaria vinculadas ao cromosoma relacionado con X (para a revisión, a ver) que resultan en proteinuria e hipercalciana acompañada nalgúns casos de raquitismo ou osteomalacia con hipofosfatemia. Na maioría dos casos, a enfermidade maniféstase pola infancia e evoluciona variable cara ao fracaso renal. As proteínas excretadas son esencialmente proteínas de peso molecular (< 40.000 daltons) capaz de pasar polo filtro glomerulaulado e a hipercalcieron é moderada.

(→) m / s 1996, n. ° 4, p. 542

Unha estratexia de clonación posicional identificou un único xene responsable das catro formas coñecidas da enfermidade. A natureza da proteína codificada por este xene, a canle CL-CLC-5, causou unha certa sorpresa xa que non deu explicacións inmediatas do cadro clínico observado na enfermidade dos dentes. Non obstante, era coñecido que as proteínas filtradas pola gloméla son restas da orina primitiva no tubo proximal por unha endocitose dependente do receptor megalino, entón dirixido ao compartimento lisosomal a ser degradado. O pH dos endosomas mantense ácido grazas á presenza dunha bomba H +Apase e tamén se asumiu que unha CL-, condutancia paralela da bomba H +, permitiu neutralizar a carga capacitiva da membrana vesicular inducida. Por A acumulación intravenica de protóns (Figura 5A). Estes elementos que serven como fío condutor, podería sospeitar que a canle CLC-5 estivo involucrada en endocitosis e / ou mecanismos de transcitostosis. A produción de anticorpos específicos contra esta canle permitiu verificar que a canle CLC-5 realmente se expresa nas células do túbulo proximal dos nenos da rata, ao nivel dos endosomas periféricos, onde coincide preferentemente coa bomba. H + vacuolar (Figura 5C). A implicación da canle CLC-5 no fenómeno de endocitosis das proteínas filtradas foi confirmada máis directamente coa análise das liñas do rato cuxo xene de canle CLC-5 foi invalidado.

Varias observacións experimentais e médicas permanecen inexplicables. En primeiro lugar, as anomalías do metabolismo do fosfato e calcio atopadas durante a enfermidade dos dentes non se entenden completamente. Ademais, a función potencial de CLC-5, expresada dentro do tubo de colector nas células implicadas na secreción de ácido, é un completo descoñecido. O interrogatorio adicional deriva da presenza, inexplicable ata a data, da canle CLC-5 nas células intestinais onde se atopa coas bombas de H + Vacuolar nos endosomas (Figura 5D). Finalmente, as propiedades das canles CLC-5 non están idealmente adaptadas a unha transferencia de Cytosol clipe á luz do endosoma. De feito, os CLC-5 son inhibidos a pH ácido e parecen promover a saída de CL- ao citoplasma en lugar da súa entrada no compartimento endosomal (ver a figura 5b).

thumbnail Figura 5.

A canle CLC-5 intracelular. A. A bomba H + permite a acidificación das vesículas intracelulares. En ausencia dunha canle CL, a acumulación de cargas positivas na vexiga (por transferencia de protóns) induciría a diferenza de potencial eléctrico a través da membrana vesicular (positiva con respecto ao citoplasma) que limitaría a acumulación de protóns intravenxos. A “carga capacitativa” da membrana vesicular polos protóns é neutralizada pola entrada simultánea de CL- a través de CLC-5. B. Curva dando a corrente macroscópica producida por CLC-5 recombinante expresada no oocito Xenope segundo o potencial imposto. Teña en conta que as únicas correntes significativas son positivas: corresponden a unha entrada de Cl- na cela.É admitido que a orientación do CLC-5 na membrana vesicular é a mesma que na membrana plasmática, é dicir que o lado citoplasmático da proteína segue sendo o mesmo. Nestas condicións, unha corrente positiva no gráfico corresponde a un fluxo de CL-dirixido desde o compartimento intravenico ata o citoplasma. Isto é contrario ao que se espera. C. Localización intracelular de CLC-5 no túbulo de bypass proximal de ratas. L: luz tubular. D. Localización intracelular de CLC-5 en enterocitos de ratas. A canle CLC-5 (en vermello) está situada principalmente en estruturas vesiculares concentradas por riba do núcleo e non co-loca-lise coa sucrase-isomaltase (en verde) usada como marcador do bordo do pincel. L: luz do intestino.

As outras canles CLC: Funcións a miúdo indeterminada

CLC-2 é parte, como CLC-1 e CLC-K, da primeira subfaminación CLC (Figura 1A). Só se abre a moi pouco potenciais fisiolóxicos moi negativos. Non obstante, a actividade fisiolóxica é posible en medio ácido ou hipo-osmolar; Aumenta coa concentración de CL-intracelular. Un clutorio actual para o producido por CLC-2 só foi descrito en poucos tipos de células, pero é admitido que CLC-2 é omnipresente. Propuxéronse tres funcións: (1) Participación na secreción de HCL no estómago; (2) Control da concentración do intracelular en certos tipos neuronais coa modulación da resposta inhibitoria gabaergica; e (3) secreción de epitélicos CL-en. Esta última hipótese ten certa popularidade. O CLC-2 é realmente expresado en varios tecidos epiteliales que son o obxectivo da fibrosis quística e está situado na membrana apical. O CLC-2 podería, polo tanto, substituír a CFTR (regulador de condutores de transmembrana de fibrose cístico) en materias con fibrosis quística. De feito, a investigación fisiolóxica anatomo dos ratones cuxo xene CLC-2 foi invalidado máis ben un papel na barreira hematospermica (células Sertoli, células de leidig) e na capa pigmentada externa da retina. Neste último caso, só se demostrou con seguridade que CLC-2 foi responsable dunha secreción de CL-.

As outras canles CLC, aquelas que pertencen ás subfamilias 2 e 3 (Figura 1A), principalmente localizar As membranas de organisomes intracelulares: endosomas perinucleares e lisosomas (CLC-3, CLC-7), vesículas sinápticas (CLC-3), reticulum endo-plasmic (CLC-6) e aparellos de Golgi (GEF1, canle de CLC da léveda Saccharomyces cerevisiae ). Permanecen determinadas as súas funcións precisas. A análise fisiolóxica dos modelos de rato con xenes CLC-3, CLC-5 e CLC-7 foi invalidada (Táboa I), polo momento, produce resultados mixtos. Como Kornak et al sinalou. Os ataques fenotípicos son puntuais e non parecen afectar os procesos de endocitosis no seu conxunto a pesar dunha ampla distribución de tecidos destas canles. Así, a capacidade de acidificación do compartimento lisosomal é retenida en ratones cuxo xene CLC-7 foi invalidado aínda que esta canle normalmente se expresa en lisosomas. Isto suxire a participación doutras canles CL, desde a familia CLC ou outras familias de canles CL-intracelulares. Na actualidade, admite que a función das canles de clin-intracelulares é neutralizar os protóns transportados polas bombas de vacuolar H +. Non obstante, outras funcións son concebibles. No caso de Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, suxeriuse que o clin-intravésicular catalizaría a incorporación de cobre a un metalo-oxidasa, FET3P, que dá un papel de modulador á canle GEF1 a través do control da concentración do concentración de cl – intravésicular.

A localización intracelular dos CLCs da segunda e terceira subfamilios non é necesariamente exclusiva. Hai moito tempo que se considerou que CLC-3 foi implantado sobre as membranas de plasma de moitas células e subpou ás correntes agarradas por un aumento do volume celular. Esta hipótese agora está abandonada (ver con todo). Doutra banda, un recente estudo CLC-4 sobre a membrana plasmática apical das células intestinais e suxire que podería participar na secreción de Cl- neste epitelio. Tamén se demostra unha ubicación complementaria sobre a membrana plasmática para CLC-7. O CLC-7 exprésase na membrana lisosomal, pero tamén no bordo plisado dos osteoclastos. Esta membrana de plasma especializada leva moitas bombas H +Pases que garanten a acidificación de lagoas extracelulares onde se realiza a resorción ósea (→).As mutacións CLC-7 son responsables de osteopetrips en humanos e a invalidación CLC-7 en ratones induce unha grave osteopérios. Os osteoclastos teñen entón membranas plisadas mal desenvolvidas e non forman lagoas de resorción. Ademais, a diferenza dos osteoclastos dos ratos normais, os osteoclastos de cultura, dos ratones cuxo xene CLC-7 foi invalidado, non poden acidificar o medio extracelular. Este último resultado parece confirmar que a canle CLC-7 é necesaria para o correcto funcionamento das bombas H + na membrana plisada.

(→) M / S 2001, N ° 12, p. 1260

O Barttin, unha subunidade reguladora de canles CLC

As canles iónicas son con máis frecuencia os complexos de proteínas formados por subunidades condutivas (subunidades α que participan na formación do poro de condución) e as proteínas reguladoras de accesorios (subunidades β). No caso das canles de CLC, a existencia de proteínas reguladoras foi subministrada pero non comprobada. O recente descubrimento dunha proteína que está asociada específicamente ás canles CLC-K (pero non CLC-1, CLC-2 ou CLC-5) é, polo tanto, é importante e dá unha nova iluminación á organización CLC (→). Esta proteína chamada Barttine ten unha estrutura totalmente diferente ás canles de CLC e comprende só dous segmentos transmembrana; Non ten actividade de canle por si só, senón que promove a inserción dos dous CLC-KS na membrana plasmática. Isto explica a posteriori por que as canles CLC-K Human e os seus ortólogos de murina non producen seos (ou correntes débiles) cando se expresan só no oocito Xenope. As mutacións do xene Barttine inducen a síndrome de trueque grave (forma antenatal), acompañada por nefrocalcinosis e asociada á xordeira neuroensora. Nos ratos, Barttin está situado na membrana basolateral das partes do tubo renal que expresan o CLC-K e nas células marxinais da raia vascular do oído interior (onde tamén se localiza con estas dúas canles).. O Barttin é actualmente a única subunidade reguladora das canles de CLC que foi identificada pero é probable que outras proteínas deste tipo sexan descubertas no futuro.

(→) M / S 2002, N ° 2 , p. 163

Conclusións

Ao final deste horizonte, hai que lembrar que a distribución de canles CLC é moi diversa xa que se descubriron as canles de CLC, non só en mamíferos, senón tamén En plantas, bacterias, levadura ou en caenorhabditis elegans. Non hai dúbida de que a investigación sobre estas canles é probable que nos ensine moito sobre a fisioloxía destes organismos e, Ricochet, sobre a operación e propiedades dos CLC de mamíferos. Isto é particularmente certo de Caenorhabditis elegans que, co seu directorio celular limitado e 6 canles CLC, é unha ferramenta de análise de primeira opción.

En segundo lugar, no estado actual do coñecemento, a contribución de CLC a procesos fisiolóxicos que se producen Na membrana plasmática é relativamente modesto en comparación co doutras canles CL. Os CFTR e as canles que se adhiren por calcio intracelular (CL-CA) desempeñan un papel importante nas epiteliales separadas dos respectivos controis de AMP e calcio cíclico. Os canles CLCA son, ademais, expresados en tecido cardíaco e no músculo liso. Outra canle, a canle limpa por un aumento no volume celular foi observado en moitos tipos de células, ata o punto que pensamos omnipresentes. Por iso, é así nas membranas de organismos intracelulares que o papel das canles CL-CLC parece potencialmente o máis grande e máis orixinal.

Finalmente, as canles CLC non son interesantes polas súas funcións fisiolóxicas. Pero tamén Pola orixinalidade da súa organización: dobre poro, modulación de actividade polo anión permeando. Apostamos que a investigación futura traerá o seu lote de descubrimentos estimulantes e axudaranos a comprender mellor os arcanes do funcionamento das canles CL e da selectividade aniónica, un problema fundamental e non resolto da biofísica das canles.

Referencias

  1. Teulon J. Propiedades e funcións da canle de cloruro das Epituras. En: Cléric C, Friedlander G, EDS. Bioloxía e Patoloxía da Epitelia. París: Edicións EDK, 2000: 97-106.
  2. Edelman A, Fanen P. CFTR (regulador de condución de Fibrose de Fibrose), unha proteína multifuncional. En: Cléric C, Friedlander G, EDS. Bioloxía e Patoloxía da Epitelia. París: Edicións EDK, 2000: 69-79.
  3. Jentsch TJ, Friedrich T, Schriever a, Yamada H. A familia CLC Chloride Chloride. PfLüg Arch 1999; 437: 783-95.
  4. Wills NK, Fong P.CLC Chloride Canles en Epithelia: progreso recente e crebacabezas restantes. Noticias Physiol Sci 2001; 16: 161-6.
  5. Uchida S. En papel vivo das canles de cloruro de CLC no ril. AM J Physiol Renal Physiol 2000; 279: F802-8.
  6. Maduke M, Miller C, Mindell JA. Unha década de canles de cloruro de CLC: estrutura, mecanismo e moitas preguntas incómodas. Annu Rev Biophys Biomol Struct 2000; 29: 411-38.
  7. Fahlke C. ION PERDEATION E SELECTIVIDADE EN CLC CLC CLORIDE CANTALES. AM J Physiol Renal Physiol 2001; 280: F748-57.
  8. Schriever Am, Friedrich T, Pusch M, Jentsch TJ. CLC Chloride Canles en Caenorhabditis elegans. J Biol Chem 1999; 274: 34238-44.
  9. Foskett JK. CLC e CFTR Chloride Charn Channel Gating. Annu Rev Physiol 1998; 60: 689-717.
  10. Rychkov GY, Pusch M, Roberts ML, Jentsch TJ, Bretag Ah. Permección e bloque da canle de cloruro muscular esquelético, CLC-1, por anións estranxeiros. J Gen Physiol 1998; 111: 653-65.
  11. Pusch M. batendo na porta da canle. O ión de cloruro de permeamento actúa como a carga de gating en CLC-0. J gen physiol 1996; 108: 233-6.
  12. Hussy N, Forestier C, Vavasseur a, Becq F, Valmier J. Les Canaux Clorure Ou Comentario Un Poisson Électrique Éclaire La Pathologie Humaine. Med Sci 1999; 15: 1003-7.
  13. Miller C, MM branco. Estrutura dimérica de canles de cloruro único de Torpedo Electroplax. Proc Natl Acad Sci Estados Unidos 1984; 81: 2772-5.
  14. Dutzler R, Campbell Eb, Cadene M, Chait BT, Mackinnon R. A estrutura de raios X dunha canle de cloruro de CLC a 3.0 å revela a base molecular da selectividade do anión. Natureza 2002; 415: 287-94.
  15. Pusch M, Jordt Se, Stein V, Jentsch TJ. Dependencia de cloruro das portas de canle de cloruro activada por hiperpolarización. J Physiol 1999; 515: 341-53.
  16. LEHMANN-HORN F, JURKAT-ROTT K. Canles de ións de tensión e enfermidade hereditaria. Physiol Rev 1999; 79: 1317-72.
  17. Bryant SH, MORALES-AGUILERA A. CHLORIDE conductivo en fibras musculares normais e miootónicas e a acción dos ácidos aromáticos monocarboxílicos. J Physiol 1971; 219: 367-83.
  18. Adrian RH, Bryant Sh. Sobre a descarga repetitiva nas fibras musculares miootónicas. J. Physiol 1974; 240: 505-15.
  19. Guinamard R, Chraibi A, Teulon J. Unha pequena canle CL de condutura no extremo espeso do rato que está activado por ATP e proteína quinasa A. J Physiol (Lond) 1995; 485: 97-112.
  20. Canle de cloruro activado por PAULAIS M, Teulon J. Campas na membrana basolateral do membro ascendente espeso do renal do rato. J membbr biol 1990; 113: 253-60.
  21. Reeves WB, Winters CJ, Andreoli te. Canles de cloruro no lazo de Henle. Annu Rev Physiol 2001; 63: 631-45.
  22. Jeck N, Konrad M, Peters M, Weber S, Bonzel KE, SEYBERTH HW. Mutacións no xene Chloride Channel, CLCNKB, que conduce a un fenotipo de bartter-Gitelman mixto. Pediatr Res 2000; 48: 754-8.
  23. Blanchard a, Poussou R, Paillard M. Syndromes de Bartter et Gitelman: Deux Syndromes, Quatre Gènes. Medier endocrinal 2000; 2: 301-9.
  24. Scheinman SJ. Nefrolítica hipercalciárbol ligada a X: síndromes clínicos e mutacións de canles de cloruro. Riñón int 1998; 53: 3-17.
  25. Leheste Jr, Rolinski B, Vorum H, et al. Megalin knockout ratones como modelo animal de baixo peso molecular proteinuria. AM J Pathol 1999; 155: 1361-70.
  26. Mellman I, Fuchs R, Helenius A. Acidificación dos camiños endocíticos e exocíticos. Annu Rev Biochem 1986; 55: 663-700.
  27. Gunther W, Luchow a, Cluzeaud F, Vandewalle A, Jentsch TJ. CLC-5, a canle de cloruro mutada na enfermidade de Dent, colocaliza coa bomba de protón en células renales endocitoticamente activas. Proc Natl Acad Sci Estados Unidos de 1998; 95: 8075-80.
  28. Piwon N, Gunther W, Schwake M, Bosl Mr, Jentsch TJ. A perturbación CLC-5 Cl-Channel impide a endocitosis nun modelo de rato para a enfermidade de Dent. Natureza 2000; 408: 369-73.
  29. Vandewalle A, Cluzeaud F, Peng KC, et al. Distribución de tecidos e localización subcelular da canle de cloruro CLC-5 en células intestinais de Rat. AM J Physiol Cell Physiol 2001; 280: C373-81.
  30. Noulin JF, Fayolle-Julien E, Desaphy JF, Poindessault JP, Joffre M. Hinchazón e Campamento en Hyperpolarization activado CL- CL- Células en células Leydig. AM J Physiol 1996; 271: C74-84.
  31. FRITSCH J, Edelman A. Modulación da actual Activada-Activada en Hiperpolarización en células epiteliales intestinais de T84 Humano por fosforilación. J Physiol 1996; 490: 115-28.
  32. Stobrawa SM, Breiderhoff T, Takamori S, et al. A interrupción de CLC-3, unha canle de cloruro expresada en vesículas sinápticas, conduce a unha perda do hipocampo. Neuron 2001; 29: 185-96.
  33. Poulain B. Libération des neurotransmetteurs. En: Tritsch D, Chesnoy-Marchais D, Feltz A, Eds. Physiologie du Neurone. París: Doin, 1998: 529-68.
  34. buyse g, trouet d, voets t, et al.Evidencia para a localización intracelular da canle de cloruro (CLC) -Type Proteins: Co-Localización de CLC-6A e CLC-6C co Sarco / Endoplasmic-Reticulum Ca2 + Pump Serca2b. Biochem J 1998; 330: 1015-21.
  35. KORNAK U, KASPER D, BOSL MR, et al. A perda da canle de cloruro CLC-7 leva á osteopérios en ratos e home. Cell 2001; 104: 205-15.
  36. Davis-Kaplan Sr, Askwith CC, Bengtzen AC, Radisk D, Kaplan J. Cloride é un efector alostérico de montaxe de cobre para a léveda Mulicopper Oxidasa FET3P: un papel inesperado para canles de cloruro intracelular. Proc Natl Acad Sci Estados Unidos de 1998; 95: 13641-5.
  37. Strange K, Emma F, Jackson PS. Fisioloxía celular e molecular de canles de anión sensibles ao volume. AM J Physiol 1996; 270: C711-30.
  38. Clapham D. Como perder o seu hipocampo traballando en canles de cloruro. Neuron 2001; 29: 1-3.
  39. Mohammad-Panah R, Ackerley C, Rommens J, Choudhury M, Wang Y, Bear CE. As canles de cloruro de CLC-4 co-localízase con transmembranar da fibrose cística condutância regulador e poden mediar fluxo de cloruro a través da membrana apical do epitelio intestinal. J Biol Chem 2002; 277: 566-74.
  40. Cleiren E, Bénichou O, Van Hul E, et al. Albers-Schönberg enfermidade (Osteopetrose dominante autosómica, tipo II) Resultados de mutacións no xene CLCN7 Chloride Chloride. Hum Mol Genet 2001; 10: 2861-7.
  41. Birkenhäger R, Otto E, Schürmann MJ, et al. A mutación do BSND provoca a síndrome de Bartter con xordeira sensorial e insuficiencia renal. Nat Genet 2001; 29: 310-4.
  42. Estévez R, Boettger T, Stein V, et al. Barttin é unha beta-subunidade de canle CL-SUBUNIT crucial para a reabsorción renal e a secreción de K +. Natureza 2001; 414: 558-61.
  43. Chen TY, MILLER C. Nonquilibrium Gating e dependencia de tensión da canle CLC-0 CL. J gen physiol 1996; 108: 237-50.
  44. pusch m, luwig u, rehfeldt a, jentsch tj. Gating da canle de cloruro dependente de tensión CIC-0 polo anión permeante. Natureza 1995; 373: 527-31.
  45. Fahlke C, Rudel R, Mitrovic N, Zhou M, George Al Jr. Un residuo de ácido aspártico importante para a gating dependente de tensión de canles de cloruro muscular humano. Neuron 1995; 15: 463-72.
  46. Kaissling B. Aspectos estruturais dos cambios adaptativos na excreción de electrólitos renais. AM J Physiol 1982; 243: F211-26.

Liste des tableaux

Tableau I.

caractéristiques Générales DES CANUX CLORURE CLC DES MAMMIFÉRES. La Distribución Tissaire Donnée N’Oeste Pas Exhaustive ET Peut Varier d’Une Espèce à l’autre. Les Mutations de CLC-7 Sont à l’origine de deux formes d’ostéopérstas Humaine: Une forme à caractère autosomique récessif et une forme à caractère autosomique dominante (maladie d’albers-schönberg tipo II). La dégénérescence rétinienne n’a pas la même origine dans tous les modèles de souris invalidées: dans le cas de l’invalidación du gène codant pour clc-2, il s’agit d’une dégélileescence de la couche externa pigmentée; Dans Le Cas de CLC-3, D’UNE DANGÉNERESCENCE DE LA NEURO-RÉTINE ET, DANS LE CAS DE CLC-7, D’UNE COMPRESION DU NERF OPTIQUE Qui Peut être ACCHATINE D’UNTE ANTEINTE DE LA RÉTINE.

Liste des figuras

miniatura Figura 1.

La Famille Moléculaire DES CANUX CLC CLC. A.

Arbre Phylogénétique DES CANUX CLC. Trois sous-familles ont été identifiées. Sont Représentés Les CLC Décrits Chez L’Homme (en Rouge) Plus CEUX D’UN CERT NOMBRE D’Organismos: Le Ver Caenorhabditis Elegans (CE), La Plante Arabidopsis Tha-Liana (AT), La Levure Saccharomyces Cerevisiae (SC) ET La Bactérie Escherichia Coli (CE). CLC-0 Est Le Canal de L’Organe Électrique de la Raie Torpille. Les Numéros Désignent Les Trois Sous-Familles DES CANUX CLC. Caenorhabditis Elegans posesde 6 Canaux CLC: Quatre Appartiennent à la sous-famille 1 Tandis que les deux derniers, non représentés sur legramme, appartiennent aux sous-familles 2 et 3. B. Topologie membranaire. L’analyze hidropathique un inicial Identifié 13 Domaines en Hélice α Mais Le Segmento 13 Est en Fait Intracellulaire. LA LOCALIZACIÓN DU segmento 4 est controversé. Les Motifs Appelés CBS, Identifiés Au Départ Dans La Cystathionine-B sintase, N’ont Pas de Fonction Claire. UNE MUTRATION DANS CES DOMAINES ESTÁLIA D’UN ARSESge Défectueux de la Protéine CLC DE LEVURE (GEF1) MAIS N’A PAS D’EFFT SUR D’AUTRES CLC. La Chaîne Reliant S8 à S9 Est un sitio de glucosilación Despeje TOUS LES CANAUX CLC. C. Vue Agrandie des segmentos 2-5 telle Qu’elle est postulée par Christoph Fahlke et Alfred George. Noter la localización transmem-Branaire du S4 (non identifié En tant That Tel ici). Chaque Lettre Représente Un Acide Aminé (Selon Le Code Habituel). Substitución de toute d’acide aminé sur les puntos identifiés en bleu ou blanc entraîne une cambiando de la sélectivité aniónique.En azul claro están representados aminoácidos cuxa mutación aumenta a permeabilidade do sodio. A mutación de orientación falsa que substituíndo a unha glicina cun ácido glu-emblemático na posición 230 é unha causa de miotonía conxénita, probablemente debido ao aumento da permeabilidade do sodio resultante

no texto
Thumbnail Figura 2.

Propiedades electrofisiolóxicas do CLC. A. Gravación de acordo co tempo das correntes producidas por unha única canle CL do órgano eléctrico do torpedo, reconstituída nunha bicapa lipídica artificial. A ordenada exprésase en picoamperes. A apertura dun só poro proto produce un nicho de corrente (observado m para o medio) cuxa amplitude dobra cando os dous proto-poros están abertos ao mesmo tempo (observado u por riba). D (abaixo): pechado; I: Inactivado (gravación reproducida). B. Vista esquemática do funcionamento da canle CLC-0 (despois). A canle está formada por dous protagones que constitúen unha soa canle. Cada proto-poros está pechado por unha barreira independente (en negro) que simboliza un cambio de conformación; A fixación de CL- (pellets amarelos) en sitios situados dentro do proto-poros facilitar a apertura deste último. O apego do anión é favorecido pola despolarización da membrana. Outra barreira (laranxa) controla simultaneamente os dous proto-poros. As letras baixo cada diagrama refírense á inscrición que se mostra en parte A. I: A barreira común está pechada. A canle non conduce, que as barreiras dos proto-poros están abertos ou non. M: A barreira común está aberta. A canle pode pasar anións. No exemplo ilustrado, só unha das dúas barreiras usadas polos proto-poros está aberta. U: A barreira común está aberta, así como os dous proto-poros. A intensidade da corrente é dobre do que se observa en M. D: a barreira común está aberta, pero os dous proto-poros están pechados. Non hai pases correntes. C. Influencia dos iones extracelulares sobre a probabilidade de abrir do proto-poro. A probabilidade de apertura dos aumentos de proto-poros coa despolarización segundo o mecanismo explicado na figura 2a. A diminución do CL-move a curva de activación a potenciais máis positivos. (Adaptado a).

no texto
thumbnail Figura 3.

A canle CLC-1 e MyOTONY. A. Rexistros de potenciais de acción e potencial electrotônico inducido por estimulación eléctrica sobre fibras musculares intercostales de cabra. A intensidade da estimulación eléctrica aplicada á fibra muscular aparece baixo cada rexistro e exprésase en nanoamperes (reproducido, co permiso de J Physiol). A: Control de fibra, só se observa un potencial de acción; B: A fibra dun animal miootónico, varios potenciais de acción provocan a estimulación que ten tres veces menos intensidade; C: Fibra de testemuña, obsérvase un tren potencial de acción nas fibras de control cando o cloruro extracelular é substituído por un anión incondicional (as canles de cloruro xa non poden realizar a súa función). Esta situación reproduce a resposta observada en cabras myotónicas. B. Representación esquemática da canle CLC-1 e unha serie de mutacións equivocadas en pacientes con miotonía. A primeira letra denota o código do aminoácido salvaxe, o número, a posición e a segunda letra a substitución observada. Estas mutacións, con excepción de G230 (Figura 1C), move a curva de activación a tensións máis positivas. A mutación que se mostra en púrpura reverte a sensibilidade á tensión da canle mostrando un fenómeno de activación de hiperpolarización dominante.

no texto
Miniatura Figura 4.

Absorción de cloruro transcelular no túbulo renal. A. Diagrama de dous nefrones do ril (adaptado, co permiso de AM J Physiol eo autor). A superficie da renda está a pé, a papilla a continuación. TCD: tubo evidente distal; Bola: porción ancha da rama ascendente do mango de Henle; Bolsa: gran parte da rama ascendente do mango de Henle. En negro, o tubo proximal. B. Diagrama do transporte de NACL no balón. A luz do túbulo, que contén a orina en formación, é á esquerda do debuxo, a intérica á dereita.Están representados: un co-transporte Na + -K + -2cl-, inhibido por furosemida, na + bomba, K + -Apase, condutores K + e unha condución de clin-bollative. O esquema simplifícase para facilitar a comprensión. Esquema de transporte de C. NACL no TCD. Un co-transporte Na + -cl-, inhibido por Thiazides, está presente na membrana apical. D. Patch-Appamp Gravación de “Channel individual” da actividade de dúas canles CL- na membrana de ralas basoladas do balón. Estas canles difieren da súa condutividade elemental: 9 picosiemens nun só caso, 40 picosiemens no outro caso. Un dos problemas actuais é establecer a correspondencia entre as tres canles endóxenas e as canles clonadas.

no texto
miniatura Figura 5.

A canle CLC-5 intracelular. A. A bomba H + permite a acidificación das vesículas intracelulares. En ausencia dunha canle CL, a acumulación de cargas positivas na vexiga (por transferencia de protóns) induciría a diferenza de potencial eléctrico a través da membrana vesicular (positiva con respecto ao citoplasma) que limitaría a acumulación de protóns intravenxos. A “carga capacitativa” da membrana vesicular polos protóns é neutralizada pola entrada simultánea de CL- a través de CLC-5. B. Curva dando a corrente macroscópica producida por CLC-5 recombinante expresada no oocito Xenope segundo o potencial imposto. Teña en conta que as únicas correntes significativas son positivas: corresponden a unha entrada de Cl- na cela. É admitido que a orientación do CLC-5 na membrana vesicular é a mesma que na membrana plasmática, é dicir que o lado citoplasmático da proteína segue sendo o mesmo. Nestas condicións, unha corrente positiva no gráfico corresponde a un fluxo de CL-dirixido desde o compartimento intravenico ata o citoplasma. Isto é contrario ao que se espera. C. Localización intracelular de CLC-5 no túbulo de bypass proximal de ratas. L: luz tubular. D. Localización intracelular de CLC-5 en enterocitos de ratas. A canle CLC-5 (en vermello) está situada principalmente en estruturas vesiculares concentradas por riba do núcleo e non co-loca-lise coa sucrase-isomaltase (en verde) usada como marcador do bordo do pincel. L: luz do intestino.

no texto

Deixa unha resposta

O teu enderezo electrónico non se publicará Os campos obrigatorios están marcados con *